产品货号：
WH0037
中文名称：
高纯度质粒小量提取试剂盒(1～5mL)
英文名称：
HighPure Mini Plasmid DNA Kit(1-5mL)
产品规格：
50次
发货周期：
1～3天
产品价格：
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本试剂盒采用碱裂解法裂解细胞，再通过离心吸附柱在高盐状态下特异性地结合溶液中的DNA。离心吸附柱中采用的硅基质材料为本公司新型材料，高效、专一吸附DNA。由于增加了过滤柱，与普通的提取方法相比，本试剂盒可去除杂质蛋白及细胞中其他有机化合物，适用于提取1～5mL过夜培养的大肠杆菌，质粒提取得率和质量与宿主菌的种类和培养条件，细胞的裂解，质粒拷贝数，质粒的稳定性，抗生素等因素有关。
使用本试剂盒提取的质粒DNA可适用于转染多种细胞及各种常规操作，包括酶切、PCR、测序、连接等实验。
提取得率：
产品组成：
储存条件：
该试剂盒置于室温(15～25℃)干燥条件下，可保存12个月，更长时间的保存可置于2～8℃。2～8℃保存条件下，若溶液产生沉淀，使用前应将试剂盒内的溶液在室温放置一段时间，必要时可在37℃水浴中预热10min，以溶解沉淀。第一次使用前将RNase A加入溶液P1中，混匀后置于2～8℃保存，可稳定保存12个月以上。单独包装的RNase A在室温可稳定保存12个月以上。
注意事项：（请务必在使用本试剂盒之前阅读此注意事项）
操作步骤：
使用前请先在漂洗液PW中加入无水乙醇，加入体积请参照瓶上的标签。
低拷贝或大质粒（＞10kb）提取：
如果所提质粒为低拷贝质粒或大于10kb的大质粒，应加大菌体使用量，使用5～10mL过夜培养物，同时按照比例增加P1、P2、P3的用量，洗脱缓冲液TB应在65～70℃水浴预热，在吸附和洗脱时可以适当的延长时间，以增加提取效率。其它步骤相同。
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使用本试剂盒提取的质粒DNA可适用于转染多种细胞及各种常规操作，包括酶切、PCR、测序、连接等实验。
提取得率：
| 质粒类型 | 菌液量 | 得率 | 质粒 |
| 低拷贝 | 1～5mL | 3～12μg | pBR322,pACYC及其衍生载体， pSC101及其衍生载体，SuperCos,pWE15 |
| 高拷贝 | 1～5mL | 6～30μg | pTZ,pUC,pBS,pGM-T |
产品组成：
| 组分 | 规格 |
| 平衡液BL | 30mL |
| 溶液P1 | 15mL |
| 溶液P2 | 15mL |
| 溶液P3 | 20mL |
| 去蛋白液PD | 30mL |
| 漂洗液PW | 15mL |
| 洗脱缓冲液TB | 15mL |
| RNase A (10mg/ml) | 150μL |
| 过滤柱CS | 50个 |
| 吸附柱CP3 | 50个 |
| 收集管(2mL) | 100个 |
储存条件：
该试剂盒置于室温(15～25℃)干燥条件下，可保存12个月，更长时间的保存可置于2～8℃。2～8℃保存条件下，若溶液产生沉淀，使用前应将试剂盒内的溶液在室温放置一段时间，必要时可在37℃水浴中预热10min，以溶解沉淀。第一次使用前将RNase A加入溶液P1中，混匀后置于2～8℃保存，可稳定保存12个月以上。单独包装的RNase A在室温可稳定保存12个月以上。
注意事项：（请务必在使用本试剂盒之前阅读此注意事项）
- 溶液P1在使用前先加入RNase A（将试剂盒中提供的RNase A全部加入），混匀，置于2～8℃保存。
- 使用前先检查平衡液BL、溶液P2和P3是否出现浑浊，如有混浊现象，可在37℃水浴中加热几分钟，即可恢复澄清。
- 注意不要直接接触溶液P2和P3，使用后应立即盖紧盖子。
- 所有离心步骤均为使用台式离心机室温下进行离心，速度为12000rpm (~13400×g)。
- 提取的质粒量与细菌培养浓度、质粒拷贝数等因素有关。
- 实验前使用平衡液处理吸附柱，可以充分激活硅基质膜，提高得率。
- 用平衡液处理过的柱子最好当天使用，放置时间过长会影响效果。
操作步骤：
使用前请先在漂洗液PW中加入无水乙醇，加入体积请参照瓶上的标签。
- 柱平衡步骤：向吸附柱CP3中（吸附柱放入收集管中）加入500μL的平衡液BL，12000rpm(~13400×g)离心1min，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。（请使用当天处理过的柱子）
- 取1～5mL过夜培养的菌液加入离心管中，12000rpm (~13400×g)离心1min，尽量吸除上清（菌液较多时可以通过几次离心将菌体沉淀收集到一个离心管中）。
- 向留有菌体沉淀的离心管中加入250μL溶液P1 （请先检查是否已加入RNase A），使用移液器或涡旋振荡器彻底悬浮细菌细胞沉淀。
注意：如果有未彻底混匀的菌块，会影响裂解，导致提取量和纯度偏低。 - 向离心管中加入250μL溶液P2，温和地上下翻转6～8次使菌体充分裂解。
注意：温和地混合，不要剧烈震荡，以免打断基因组DNA，造成提取的质粒中混有基因组DNA片断。此时菌液应变得清亮粘稠，所用时间不应超过5min，以免质粒受到破坏。
如果未变得清亮，可能由于菌体过多，裂解不彻底，应减少菌体量。 - 向离心管中加入350μL溶液P3，立即温和地上下翻转6～8次，充分混匀，此时会出现白色絮状沉淀。12000rpm (~13400×g)离心10min，用移液器小心地将上清转移到过滤柱CS（过滤柱放入收集管中），注意尽量不要吸出沉淀。
注意：P3加入后应立即混合，避免产生局部沉淀。如果上清中还有微小白色沉淀，可再次离心后取上清。 - 12000rpm (~13400×g)离心2min，小心地将离心后收集管中得到的溶液转移到吸附柱CP3中（吸附柱放入收集管中），（如果过滤柱中有残余的液体说明步骤5吸取的上清中杂质过多，可以延长离心的时间；如果离心后收集管底部有少量的沉淀，尽量的吸取上清）。
- 12000rpm (~13400×g)离心30～60sec，倒掉收集管中的废液，将吸附柱CP3放入收集管中。
- 向吸附柱CP3中加入500μL去蛋白液PD，12000rpm (~13400×g)离心30～60sec，倒掉收集管中的废液，将吸附柱CP3放入收集管中。
- 向吸附柱CP3中加入600μL漂洗液PW（请先检查是否已加入无水乙醇），12000rpm(~13400×g)离心30～60sec，倒掉收集管中的废液，将吸附柱CP3放入收集管中。
- 重复操作步骤9。
- 将吸附柱CP3放入收集管中，12000rpm (~13400×g)离心2min，目的是将吸附柱中残余的漂洗液去除。
注意：漂洗液中乙醇的残留会影响后续的酶反应（酶切、PCR等）实验。为确保下游实验不受残留乙醇的影响，建议将吸附柱CP3开盖，置于室温放置数分钟，以彻底晾干吸附材料中残余的漂洗液。 - 将吸附柱CP3置于一个干净的离心管中，向吸附膜的中间部位悬空滴加50～100μL洗脱缓冲液TB，室温放置2min，12000rpm (~13400×g)离心2min，将质粒溶液收集到离心管中。
注意：为了增加质粒的回收效率，可将得到的溶液重新加入离心吸附柱中，重复步骤12。洗脱液的pH值对于洗脱效率有很大影响。若用ddH2O做洗脱液，应保证其pH值在7.0～8.5范围内，pH值低于7.0会降低洗脱效率。洗脱缓冲液体积不应少于50μL，体积过小影响回收效率。且DNA产物应保存在-20℃，以防DNA降解。
低拷贝或大质粒（＞10kb）提取：
如果所提质粒为低拷贝质粒或大于10kb的大质粒，应加大菌体使用量，使用5～10mL过夜培养物，同时按照比例增加P1、P2、P3的用量，洗脱缓冲液TB应在65～70℃水浴预热，在吸附和洗脱时可以适当的延长时间，以增加提取效率。其它步骤相同。
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